抗体品牌及产品介绍
实验中很多老师同学会遇到这些情况:
看Paper看到头疼,但还是选不到合适的抗体
WB 跑出来干扰太多,优化很多条件还是没得到满意条带
明明按照师姐的IF protocol做的,没有信号,难道抗体出了问题?
抗体是蛋白研究最常用的工具之一,在 Western blot中揭示细胞或组织样本中特定蛋白质的表达量的多少。用于免疫组化和免疫荧光染色,以便于在显微镜下可视化地观察蛋白,以及其它各类基于抗体会与特定生物分子结合的实验。
据估计,每年因购买质量差的抗体导致的损失达到8亿美金,更不要说所造成的无数的错误结论、不可解释的(或曲解)实验,以及浪费病人样本和增加的研究时间。瑞典皇家理工学院的研究员Mathias Uhlén表示,因抗体而造成的挫败已经太多了,是时候做出改进了。
默克致力于为您提供可增强验证的ZooMab ®系列重组表达抗体,增强验证是默克ZooMab ®系列重组表达抗体的首要基础,验证其对靶标蛋白具有特异性、可重现性和高亲和力。
ooMab® 重组抗体
1.组分优化:纯净安全
在HEK293 细胞中重组表达,使用高度可控、低生物负载的生产工艺进行生产,最大限度减少相关的问题或风险。
同时不含抑菌剂(如叠氮化钠)或动物来源的防腐剂(如BSA),避免可能危险物质或当地安全限制产生的复杂流程,并可用于体内和体外应用。
2.应用验证:至少3 种
通过多重筛选获得高亲和力、高特异性的克隆,同时每种抗体至少经过3 种以上常见应用验证,如WB,IHC,IF,ELSIA 等,一支优质抗体解决多种应用需求。
3. 工艺升级:冻干粉
独特的冻干粉形式,储存更便捷。提供25 UL 或4x25 UL 包装,无需再分装或反复冻融
(A) 使用1:100稀释的货号ZRB04338抗EGFR,11E19克隆ZooMAb®单克隆进行NIH/3T3细胞系免疫荧光分析,使用与Alexa Fluor® 488(绿色)偶联的山羊抗兔二抗染色。用鬼笔环肽(红色)标记肌动蛋白丝。用DAPI(蓝色)染色细胞核。该抗体可阳性染色质膜、细胞质。
增强抗体验证
默克抗体增加除了常规验证外,还增加了增强性验证,确保抗体可重现性、特异性和性能的额外验证数据。
01遗传策略
遗传策略 - 通过敲除/敲低方法验证抗体特异性
预期结果:在敲除/敲除验证实验中,蛋白质免疫印迹(WB)条带减少或缺失。
基因编辑CRISPR/Cas9或RNA干扰 (RNAi)基因干扰方法消除或降低靶标蛋白表达,进而将此类样品的抗体识别性能与野生型进行比较,验证蛋白质检测的特异性。随后对这些降低或消除了目标蛋白表达的改造细胞样品WB或ICC染色,评估抗体的特异性。然后将改造后的蛋白表达水平与经证表达目标蛋白的野生型样品进行比较。
RNAi敲低遗传验证实例。在用对照siRNA和两种靶标特异性siRNA探针转染的A-549细胞中,使用抗ATRX抗体(货号:HPA001906)进行蛋白质免疫印迹分析。siRNA样品中的ATRX下调证实了抗体的特异性。
02 独立抗体验证
独立抗体验证 - 通过IHC或ICC,利用多种靶向同一靶标的抗体验证抗体特异性。
预期结果:所有抗体呈现相似的染色模式或实验结果。
在给定免疫应用中,使用针对同一靶标的其他抗体执行同一操作方案并获得相同结果,证明使用该抗体获得的结果的有效性。至少结合使用两种无重叠表位的抗体和一组样品(例如来自同一组织的切片)。这种方法可提供一种额外优势,可在验证的同时比较两种抗体的结合特性。
人食道、肝、皮肤和扁桃体组织的免疫组化染色,A2ML1独立抗体(货号:HPA038847)(A)与(货号:HPA038848)(B)在组织中呈现相似的蛋白分布模式。
03 RNA-Seq正交验证
RNA-Seq正交验证 - 通过抗体依赖性方法和非抗体依赖性方法(RNA-seq)联用,验证抗体特异性。
预期结果:抗体染色强度与来自同一样本的RNA-seq数据一致。
在抗体验证过程中,正交验证方法指将免疫检测结果与非抗体依赖性方法进行比较,测定目标基因或蛋白质。
RNAseq正交验证
蛋白质免疫印迹(WB,左)和IHC(右)正交验证。选择已知RNA高/低表达的样品左图:在与RNA-seq数据(右)相关的U-251MG(VIM高表达)和MCF-7(VIM 低表达)人类细胞系中,使用抗VIM抗体(货号:HPA001762)进行蛋白质免疫印迹分析(左)。
右图:在与RNA-seq数据相关的人类肾脏(左,PLA2R1高表达)和胰腺组织(右,PLA2R1低表达)中,使用抗PLA2R1抗体(货号:HPA012657)中进行免疫组织化学分析。
04 功能实验验证
功能实验验证 - 通过免疫检测实验诱导靶抗原表达和/或活性水平变化,验证抗体特异性。
预期结果:通过WB、ICC、IF和FS免疫检测改造后的抗原活性或表达水平。
通过实验操控,可轻松体外调节许多抗原的表达和活性水平。利用常用蛋白表达或生物活性调控技术,可通过检测目标蛋白质活性或表达水平变化确定抗体特异性。功能实验验证可提供有力的抗体特异性证据,是EV的重要支柱之一。